Циклический цитруллинированный пептид. Ревматологическое обследование Анализ ат к циклическому цитруллин содержащему пептиду

Маркер ревматоидного артрита:

Описание характерных для ревматоидного артрита аутоантигенов, содержащих цитруллин, стало одним из наиболее важных открытий ревматологии последнего времени в области серологической диагностики. Цитруллин - обычный метаболит, представленный повсеместно в организме, он является не-стандартной аминокислотой, так как не может быть интегрирован в белок в процессе его синтеза. Цитруллинсодержащие белки могут образовываться только в ходе посттрансляционной модификации аргининовых остатков - реакции, катализируемой пептидил-аргининдеиминазой. Цитруллинирование - это процесс, в котором формируются цитруллинсодержащие белки. Реакция цит-руллинирования привлекла повышенное внимание ревматологов, поскольку у больных с ревмато-идным артритом (РА) выявляются аутоантитела, направленные против белков, содержащих цит-руллин. Основываясь на этих данных, был разработан доступный для клинической практики метод иммунофлуорисцентного определения антител к цитруллинсодержащим белкам, в котором в каче-стве антигенной субстанции используется синтетический циклический цитруллинированный пептид (ЦЦП).

Физиологическая роль:

Процесс цитруллинирования наблюдается в ходе естественных физиологических и патологических процессов в организме человека и играет свою роль в процессах клеточной дифференциации и апоптоза. К цитруллинированным антигенам синовиальных тканей относят: цитруллинирован-ный виментин, цитруллинированный филаггрин, цитруллинированные α-и β-цепи фибрина, цитруллинированные пептиды, входящие в состав коллагенов І и ІІ типа. В ходе разработки методов определения антител к цитруллинированным антигенам было показа-но, что использование синтетических циклических форм цитруллинированных пептидов обеспечивает большую чувствительность теста. Антитела к циклическому цитруллинированному пептиду в настоящее время признаны информативным серологическим маркером РА.

Клиническая значимость:

Ревматоидный артрит - распространённое системное аутоиммунное заболевание, которое затраги-вает около 0,5-1% населения. Эта болезнь вызывает прогрессирующее разрушение и деформацию суставов, может иметь внесуставные проявления. Ранний диагноз и соответствующая терапия ревматоидного артрита имеют решающее значение для исходов заболевания. К числу традиционных тестов серологической диагностики РА относят определение рефматоидного фактора (РФ). Однако, определение РФ имеет два существенных ограничения. Во-первых, специфичность этого теста для РА является достаточно низкой: РФ обнаруживается примерно у 5% здоровых людей, у 5-25% лиц пожилого возраста, а также у значительного числа больных с хроническими заболева-ниями. Так, классический IgM-РФ выявляется у 30-35% больных с системной красной волчанкой и системной склеродермией, 20% больных с дерматомиозитом, узелковым полиартериитом и болез-нью Бехтерева, 10-15% больных с псориатическим артритом, болезнью Рейтера, сифилисом, туберкулезом, саркоидозом, хроническим активным гепатитом. При наличии суставного синдрома IgM-РФ-позитивными оказываются 25-50% больных с инфекционным эндокардитом, 45-70% - с первичным билиарным циррозом печени, 20-75% - с гепатитом В или С, 15-65% - с другими вирусными инфекциями, 5-25% - с опухолями. Во-вторых, наличие РФ не является стабильным. Частота выявления РФ существенно зависит от длительности заболевания: в первые 6 месяцев он выявляется лишь у 15-43% больных РА, в последующем часть РФ-негативных пациентов стано-вятся РФ-позитивными. Под влиянием лечения возможна и обратная трансформация.

В 2007 году Европейской лигой против ревматизма (EULAR) были опубликованы нормативы для диагностики раннего РА и определение аутоантител против ЦЦП было отнесено к серологическому маркеру.

Эти аутоантитела могут появляться в сыворотке крови за 1 год до начала заболевания, и их встречаемость в дебюте РА составляет 40-50%, что значительно выше встречаемости РФ, которая не превышает 10-15% в начале заболевания. Именно благодаря высокой встречаемости в дебюте РА, а также специфичности, близкой к 95% (против 70% для РФ), определение анти-ЦЦП стало золотым стандартом диагностики раннего РА. В большинстве случаев иммунологическое подтверждение клинического диагноза дебюта РА становится основой раннего назначения терапии и сохранения функции суставов у пациентов с этим тяжелым заболеванием. Кроме того, тест позво-ляет дифференцировать эрозивную и неэрозивную формы РА. У анти-ЦЦП положительных паци-ентов отмечается большая степень повреждения хряща по сравнению с анти-ЦЦП отрицательными пациентами. Прогностическая ценность метода возрастает, если его используют в комбинации с РФ. Этот тест позволяет дифференцировать РА с другими заболеваниями соединительной ткани. Анти-ЦЦП могут быть обнаружены в 30% случаев серонегативного ревматоидного артрита(отрицательного по РФ). Продемонстрирована целесообразность применения этого теста в ранней диагностике артри-та и в целях прогноза недавно развившегося РА (анти-ЦЦП больше ассоциированы с прогрессией и эрозивными артритами, чем РФ). Использование анти-ЦЦП в целях мониторинга активности процесса не рекомендовано (корреляции с маркёрами активности, в т. ч. СОЭ, СРБ, не выявлено). В крупномасштабных клинических исследованиях установлено, что уровень анти-ЦЦП-антител остается стабильным по меньшей мере в течение первых 3-5 лет ревматоидного артрита. Наличие антител к циклическому цитруллинированному пептиду на момент установления диагно-за предвещает более агрессивное течение заболевания и более выраженное рентгенологическое прогрессирование, несмотря на проводимую терапию. Последующие колебания уровня этих анти-тел не отражают изменения активности заболевания. Ни НПВП, ни глюкокортикостероиды, ни большинство базисных препаратов не влияют на уровень анти-ЦЦП, что позволяет сделать вывод, что для контроля эффективности лечения данный тест не пригоден, так как на фоне применения большинства базисных и симптоматических препаратов не происходит достоверного снижения уровня антител.

Показания к назначению:

• Ранняя диагностика ревматоидного артрита (целесообразно в сочетании с РФ)
• Диагностика серонегативных (по ревматоидному фактору) форм ревматоидного артрита.
• В прогностических целях, при недавно развившемся ревматоидном артрите.

Интерпретация результата:

Повышение значений.

1. ревматоидный артрит (клиническая чувствительность - 70,6%, специфичность общая - 98,2%);
2. в некоторых случаях других заболеваний соединительной ткани, особенно СКВ (системная красная волчанка).

Исследуемый материал: сыворотка крови.

Метод определения: иммунохемилюминисцентный, Abbot Architect 2000i.

Температурный режим хранения и транспортировки:

Специальной подготовки к исследованию не требуется .

Литература:

1. С. В. Лапин, А. А. Тотолян. Антитела к цитруллинированным антигенам.// Лабораторная диагностика аутоиммунных заболеваний. Журнал "Terra Medica nova" № 3 (15) 2007.
2. Лапин С.В., Маслянский А.Л., Иливанова Е.П., Мазуров В.И., Тотолян А.А. Клиническое значение антител к цикли-ческому цитруллированному пептиду при раннем ревматоидном артрите. // Медицинская Иммунология. 2004, Т. 6, №1-2, стр 57-66.
3. О.Б. Яременко, А.М. Микитенко. Диагностика ревматоидного артрита на ранних стадиях. //Кафедра госпитальной терапии № 1 Национального медицинского университета им. А.А. Богомольца, г. Киев.
4. Alessandri C., Bombardieri M., Papa N. et al. Decrease of anti-cyclic citrullinated peptide antibodies and rheuma toid factor following anti-TNFa therapy (infliximab) in rheumatoid arthritis is associated with clinical improvement // Ann. Rheum. Dis. - 2004. - Vol. 63. - P. 1218-1221.
5. American College of Rheumatology Subcommittee on Rheumatoid Arthritis Guidelines. (2002) Guidelines for the manage-ment of rheumatoid arthritis. 2002 Update // Arthritis Rheum. - 2002. - Vol. 46. - P. 328-346.
6. Bobbio-Pallavicini F., Alpini C., Caporali R. et al. Autoantibody profile in rheumatoid arthritis during long-term infliximab treatment // Arthritis Res. Ther. - 2004. - Vol. 6. - P. R264-R272.
7. Chen H.A., Lin K.C., Chen C.H. et al. The effect of etanercept on anti-cyclic citrullinated peptide antibodies and rheumatois factor in patients with rheumatoid arthritis // Ann. Rheum. Dis. - 2006. - Vol. 65. - P. 35-39.
8. De Rycke L., Verhelst X., Kruithof E. et al. Rheumatoid factor, but not anti-citrullinated protein antibodies, is modulated by infliximab treatment in rheumatoid arthritis // Ann. Rheum. Dis. - 2005. - Vol. 64. - P. 299-302.
9. De Vries-Bouwstra J.K., Goekoop-Ruiterman Y.P.M., Van Zeben D. et al. A comparison of clinical and radiological out-comes of four treatment strategies for early rheumatoid arthritis: results of the BEST trial // Ann. Rheum. Dis. - 2004. - Vol. 63 (suppl. 1). - P. 58.
10. Emery P., Breedveld F.C., Dougados M. et al. Early referral recommendation for newly diagnosed rheumatoid arthritis: evidence based development of a clinical guide // Ann. Rheum. Dis. - 2002. - Vol. 61. - P. 290-297.
11. Combe B., Landewe R., Lukas C., et al. EULAR recommendations for the management of early arthritis: report of task force of the European Standing Committee for international Clinical Studies including Therapeutics (ESCISIT).// Ann Rheum Dis 2007; 66; 34-45.

Диагностика в ревматологии крайне сложна. Антитела к циклическому цитруллинированному пептиду, выделяемые в ходе серологического исследования препарата крови пациентов с ревматоидным артритом (РА), считают золотым стандартом постановки диагноза. Раннее выявление этого тяжелого аутоиммунного поражения опорно-двигательного аппарата поможет предотвратить или уменьшить дегенеративно-дистрофические изменения в нем. Но норма АЦЦП не всегда свидетельствует об отсутствии ревматоидного артрита.

В соотношении антител к циклическому цитруллинированному пептиду при серологии можно поставить точный диагноз по ревматоидному артриту.

Что это такое?

АЦЦП при ревматоидном артрите - белковые фракции, где структурными элементами являются аминокислоты, среди которых встречается аргинин - строительный кирпичик генетического материала человека. Производной этой аминокислоты есть цитруллин, который входит в цикл образования мочевины. У здорового человека цитруллин не участвует в синтезе белка и вскоре выводится из организма, не присоединяясь к метаболизму. Показатель Анти-ЦЦП в крови растет в случае наличия у пациента ревматоидного артрита. При этом цитруллин непосредственно участвует в апоптотических процессах гибели клеток тела.

Зачем нужен анализ?

Если у пациента в ходе первичного осмотра и сбора анамнеза были установлены характерные жалобы, ему назначают рентгенографическое обследование. Когда на рентгенограммах заметны следы дегенеративно-дистрофических явлений в суставах, нужно подтверждение диагноза с помощью лабораторных тестов. Положительный анализ на АЦЦП при ревматоидном артрите означает необходимость начала специфического лечения. Данные общего и биохимического анализа крови могут лишь подтвердить диагноз, но не опровергнуть его.

Плюсы исследования АТ к цитруллиновому пептиду

Расшифровка уровня антител на ЦП говорит о наличии в синовиальной жидкости суставов специфических иммунных комплексов, провоцирующих заболевание. Пределы показателей сигнализируют об остроте течения. Их повышение указывает на ревматоидный артрит. Острое течение этой ревматологической патологии нуждается в безотлагательном начале терапии. А поскольку экспресс-тест выполняется довольно быстро, а для забора биоматериала лаборанту не потребуется специфического оборудования, диагноз получают в кратчайшие сроки. Градация концентрации АЦЦП позволяет судить о слабоположительном или резко положительном результате.

Подготовка к проведению

Забор материала на Anti CCP производится с помощью венепункции (взятия венозной крови). Врач общей практики обязан предоставить пациенту рекомендации по специальной подготовке к сдаче анализа:

• В день визита в лабораторию больной обязан воздержаться от пищи и питья. Можно выпить только стакан чистой воды.
• За несколько дней до выполнения анализа пациент полностью исключает из меню жареные и жирные продукты, алкоголь и блюда с красителями.
• Больной не должен употреблять БАДы и витаминные комплексы в течение недели до начала лабораторного исследования.
• Желательно исключить любые физические нагрузки, физиотерапевтические процедуры, которые повышают температуру организма и ускоряют течение метаболических процессов.

Как исследуют цитрулиновый пептид?

Исследование цитрулинового пептида производится в лаборатории, длительностью до недели после забора крови у пациента.

Процедура забора крови проходит в условиях лаборатории, где придерживаются строгой стерильности. Кожу верхней трети внутренней поверхности предплечья дважды обрабатывают с помощью смоченной в спиртовом растворе ватки. На плечо накладывается специальный жгут. Пациент должен сделать сгибательные движения пальцами кисти - таким образом повышается ток крови в сосудах руки. Лаборант с помощью специальных вакуумных систем производит забор биологического материала. Последний доставляется в лабораторию и анализируется в течение нескольких часов. Сыворотка крови может храниться еще семь дней при определенной температуре. Исследование проводится с помощью иммуноферментного анализатора, далее предоставляется его расшифровка.

Норма АССР

Если концентрация антител к циклическому цитрулиновому пептиду достигает 3 ЕД/мл, это отрицательный показатель. Эта цифра считается нормой здорового человека. Верхняя граница нормального уровня антител к циклическому цитруллинированному пептиду - до 5 ЕД/мл. Норма у женщин такая же, как и у мужчин. Но у беременных и детей (в период формирования опорно-двигательного аппарата) показатели могут достигать 48-49 ЕД/мл, у пожилых - 50. Значение концентрации антител показывает таблица:

Анализ желательно подтверждать данными об уровне ревматоидного фактора (РФ) - маркера иммуноглобулиновой природы. Также остается вероятность наличия у больного серонегативного ревмоартрита, который невозможно установить с помощью этого теста.

[13-014 ] Антитела к циклическому цитруллинсодержащему пептиду, IgG

1680 руб.

Заказать

Антитела к циклическому цитруллинсодержащему пептиду, IgG, – это гетерогенная группа IgG-аутоантител, которые распознают антигенные детерминанты филаггрина и других белков, содержащих атипичную аминокислоту цитруллин.

Синонимы русские

АЦЦП, анти-ЦЦП-АТ, анти-ЦЦП, анти-ССР.

Синонимы английские

Anti-CCP, cyclic citrullinated peptide antibody, Anti-citrullinated protein antibody, Ig G; Soft-CCP, AntiCCP Antibody, Anticitrullinated Protein/Peptide Antibody (ACPA).

Метод исследования

Электрохемилюминесцентный иммуноанализ (ECLIA).

Диапазон определения: 7 - 500 Ед/мл.

Единицы измерения

Ед/мл (единица на миллилитр).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Антитела к циклическому цитруллинсодержащему пептиду, IgG, – в настоящее время один из самых информативных маркеров раннего ревматоидного артрита. АЦЦП относятся преимущественно к классу IgG и обнаруживаются в крови на самых ранних стадиях заболевания ревматоидным артритом (за 1-2 года до появления первых симптомов).

Ревматоидный артрит – наиболее распространенное хроническое аутоиммунное заболевание, характеризующееся поражением периферических суставов с развитием в них эрозивно-деструктивных изменений и широким спектром внесуставных проявлений. Характерным признаком ревматоидного артрита является симметричное поражение суставов кистей, стоп, лучезапястных, локтевых, плечевых, коленных и голеностопных суставов. Отмечается болезненность, припухлость, покраснение кожных покровов над пораженными суставами, ограничение движений и, как следствие, нарушение функции суставов. Одним из важных симптомов ревматоидного артрита является утренняя скованность в суставах длительностью более одного часа. Прогрессирующее воспаление суставов приводит к значительному ограничению их подвижности с развитием суставных отклонений.

Вначале, при поражении суставов в виде артрита, возникает необходимость в дифференциальной диагностике. При этом необходимо обращать внимание на типичные признаки ревматоидного артрита, развитие эрозивного процесса в суставах кистей, ревматоидный фактор и особенно на антитела к ЦЦП. Ревматоидный фактор недостаточно специфичен и может обнаруживаться при других аутоиммунных заболеваниях и хронических инфекциях, в то время как антитела к циклическому цитруллинсодержащему пептиду обладают более высокой специфичностью (98 %) и диагностической значимостью для выявления ревматоидного артрита. Тест также позволяет дифференцировать эрозивную и неэрозивную формы заболевания. У пациентов с повышенным уровнем антител к ЦЦП отмечается большая степень повреждения хряща сустава по сравнению с пациентами, в крови которых данные антитела отсутствуют. Это может быть использовано для прогнозирования скорости разрушения суставов на этапе раннего ревматоидного артрита, что позволяет рассматривать обнаружение АЦЦП в качестве одного из факторов неблагоприятного прогноза данного заболевания. Совместное определение ревматоидного фактора и АЦЦП позволяет диагностировать ревматоидный артрит на ранней стадии, своевременно назначить терапию и предотвратить тяжелые деструктивные изменения в суставах.

Для чего используется исследование?

• Для диагностики ревматоидного артрита на очень ранней стадии (длительность болезни
• Для диагностики серонегативных форм ревматоидного артрита (когда тест на ревматоидный фактор отрицательный).
• Ддя дифференциальной диагностики ревматоидного артрита и других аутоиммунных заболеваний с суставным синдромом.
• Чтобы оценить риск развития деструкции суставов у пациентов с ранним ревматоидным артритом.

Когда назначается исследование?

• При некоторых ревматических заболеваниях встречается суставной синдром (боль, припухлость в области суставов, утренняя скованность, локальное покраснение кожных покровов), что может усложнить постановку правильного диагноза, особенно на ранних стадиях заболевания. В данном случае анализ помогает провести дифференциальную диагностику, так как он обладает высокой специфичностью (до 98 %) и чувствительностью (до 70 %) для выявления ревматоидного артрита даже на самых ранних стадиях заболевания, когда присутствует только несколько симптомов.
• При планировании терапии ревматоидного артрита. Для пациентов, в крови которых обнаружены АЦЦП, характерно более агрессивное течение болезни с быстрым прогрессированием эрозий в суставах, поэтому на ранних этапах заболевания необходимо назначить адекватную терапию, чтобы предотвратить развитие необратимых изменений в суставах (деформаций, анкилозов).

Что означают результаты?

Референсные значения: 0 - 17 Ед/мл.

Причины повышенного уровня АЦЦП

• Ревматоидный артрит.
• Ювенильный идиопатический артрит.
• Некоторые заболевания соединительной ткани (системная красная волчанка, системная склеродермия, синдром Шегрена).
• Системные васкулиты (гранулематоз Вегенера).
• Аутоиммунный тиреоидит.

Что может влиять на результат?

У пациентов с гипергамма-глобулинемией результат теста может быть ложноотрицательным.



Важные замечания

• Для контроля за эффективностью терапии ревматоидного артрита данный анализ нецелесообразен, так как на фоне применения большинства базисных и симптоматических препаратов не происходит достоверного снижения уровня АЦЦП.
• АЦЦП появляются в сыворотке крови за 1,5 года до появления симптомов ревматоидного артрита.

• Антикератиновые антитела (АКА)
• Антиперинуклеарный фактор
• Антитела к цитруллинированному виментину (анти-MCV)
• Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК)

Кто назначает исследование?

Ревматолог, терапевт, травматолог, ортопед, хирург, врач общей практики.

Литература

• Ревматология: Национальное руководство / под ред. Е.Л. Насонова, В.А. Насоноовой. – М. : ГЭОТАР-Медиа, 2008. – 720 с.
• Клиническая ревматология (руководство для практических врачей) / под ред. члена-корресподента РАМН профессора В.И. Мазурова. – СПб.: ООО "Издательство Фолиант", 2001. – 416 с.
• Клиническое руководство по лабораторным тестам / Под ред. Н.У. Тиица. – М.: Юнимед-пресс, 2003. – 942 с.
• Журнал "Справочник заведующего клинико-диагностической лабораторией" № 6, 2010 год. Современная лабораторная диагностика ревматоидного артрита.
• EUROIMMUN Medizniche Labordiagnostika AG. Anti-CCP ELISA (IgG). 2009 год (инструкция по определениию АЦЦП).
• Anti-CCP antibody testing as a diagnostic and prognostic tool in rheumatoid arthritis.
• Oxford Journals Medicine QJM: An International Journal of Medicine Volume 100, Issue 4 Pp. 193-201.

Ревматоидным артритом поражен примерно 1% населения. Антитела к циклическому цитруллинированному пептиду (АЦЦП), открытые в начале 21 века, стали золотым стандартом дифференциальной диагностики этого тяжелого системного аутоиммунного заболевания, провоцирующего дегенеративно-дистрофические явления в сочленениях всего опорно-двигательного аппарата и имеющего множество внесуставных симптомов.

Что с собой представляет это вещество?

Циклический цитрулиновый пептид имеет белковую природу. Предшественником ЦЦП является аминокислота аргинин. В результате ее модификации образуется цитрулин. У здорового человека в метаболический цикл этот белок не вступает и выводится из организма через органы выделения. У больных, которым был поставлен диагноз ревматоидный артрит, отмечается повышение ЦЦП в плазме крови. Цитруллинированный белок участвует в смерти клеток, а также их дифференциации в специфические тканевые структуры.

Какова природа антител к циклическому цитруллинированному пептиду?

С помощью мечения красителями иммунных клеток на препаратах ученые открыли виментин или цитруллиновый антиген. Потенциальным методом борьбы с ним являлись антитела против кератина - специфические маркеры РА. Образование и включение в работу антител стимулирует белок фибрин, в большом количестве накапливающийся в синовии воспаленного сустава. АЦЦП определяются даже при серонегативном варианте течения РА.

Показания к анализу

Подтвердить наличие такой патологии можно с помощью биохимического анализа крови.

Дорогостоящий гемотест на определение антицитруллинированного циклического пептида рекомендуется сделать при наличии рентгенологических свидетельств у пациента ревматоидного артрита. Диагноз может подтверждаться общим и биохимическим анализом крови, исследованием образца синовиальной жидкости сустава. Позитивная расшифровка теста на АЦЦП является абсолютным доказательством наличия РА.

Подготовка к обследованию

Поскольку анализ крови берется из вены, пациент должен готовиться к нему следующим образом:

1. В день сдачи человек не может есть и пить ничего, кроме воды.
2. На несколько дней из рациона исключают жирные и жареные блюда, алкогольные напитки.
3. Нужно избегать употребления биологически активных добавок.
4. Важно контролировать температуру и состояние организма.
5. Должно пройти более 12 часов после физиотерапевтических процедур или физических нагрузок до момента проведения анализа.

Цитруллинированные фибриновые производные при воспалении сустава накапливаются в его синовии. Иммунные тела к пептиду, содержащему цитруллин, поступают непосредственно в плазму. Именно поэтому для анализа производится забор не синовиальной жидкости, а венозной крови.

Проведение забора субстрата

Кровь берут с помощью вакуумной системы после наложения жгута.

Процедура выполняется в стерильных условиях лаборатории. Область введения шприца несколько раз дезинфицируют спиртом. Выше места прокола накладывают жгут. Больного просят сжать пальцы в кулак несколько раз для наполнения вен руки. Кровь набирается в вакуумную систему и передается для лабораторного анализа. После извлечения иглы пациент несколько минут держит на месте прокола смоченную антисептиком ватку, зажав локоть. Плазма крови может храниться около недели. Расшифровка результатов происходит инвитро, с помощью иммуноферментного анализа (ИФА).

Расшифровка итогов

Цикличный цитруллин в синовии сустава при ревматоидном артрите, а также наличие антител к нему в крови, свидетельствуют про острое течение патологии и необходимость безотлагательной медикаментозной помощи. Выделяют положительные, ложноположительные и отрицательные результаты анализа.